Devekuşu yumurta akı ve sarısı glikoproteomlarından izole edilmiş n-glikanların HPLC-HILIC-FLD-MS/MS ile derinlemesine profillenmesi

Abstract

Protein glikozilasyonu önemli bir post-translasyonel modifikasyondur ve kritik hücresel olayları kontrol eder. Yumurta akı ve sarısından elde edilen N-glikozile proteinlerin çeşitli hücresel yolaklarda önemli roller oynadığı bilinmektedir. Bu fonksiyonları anlamak için glikoproteomlara ait N-glikan yapılarının karakterizasyonu gereklidir. Bu nedenle, bu çalışma devekuşu yumurtası akı ve yumurta sarısı glikoproteomlarının N-glikan profillerini karakterize etmeyi amaçlamaktadır. Çalışmada, devekuşu yumurta akı ve sarısı glikoproteomlarından Nglikanlar enzimatik bir süreçle salındı ve bir prokainamid etiketi ile etiketlendi. Örnekler, HPLCHILIC- FLD-MS/MS (yüksek performanslı hidrofilik etkileşim sıvı kromatografisi ile floresans ve ikili kütle spektrometrik dedeksiyon) ile analiz edildi. Devekuşu yumurta akı ve sarısı glikoproteomlarından tespit edilen N-glikan sayıları sırasıyla 39 ve 36 olarak bulundu. Devekuşu yumurtası akı glikoproteomunun N-glikanlarının yüksek oranda galaktozile olduğu (%96,64) belirlendi. Ek olarak, bisekte N-glikanların devekuşu yumurtası akı glikoproteomunda (%91.72) devekuşu yumurta sarısı glikoproteomuna (%6.74) kıyasla bol miktarda bulunmuştur. Devekuşu yumurta sarısı glikoproteomunda yüksek mannozlu N-glikanların bolluğu (%55.84) devekuşu yumurta sarısı glikoproteomundan (%2.67) önemli ölçüde daha yüksek olduğu belirlendi. Devekuşu yumurtası akı ve sarısı glikoproteomlarına ait N-glikanların fukozlanma oranı sırasıyla %4.52 ve %0.95 olarak tespit edilmiştir. Elde edilen veriler, devekuşu yumurtası akı ve sarısı glikoproteomlarının N-glikan profillerinin önemli ölçüde farklılık gösterdiğini göstermiştir.

Protein glycosylation is an essential post-translational modification and modulates critical cellular events. It is known that N-glycosylated proteins from egg white and yolk are played crucial roles in various cellular pathways. Characterization of N-glycan structures of glycoproteomes is required to understand these functions. Therefore, this study is aimed to characterize the N-glycan profiles of ostrich egg white and yolk glycoproteomes. In the study, Nglycans were released from ostrich egg white and yolk glycoproteomes by an enzymatical process and labeled with a procainamide tag. Samples were analyzed by HPLC-HILIC-FLD-MS/MS (high-performance hydrophilic interaction liquid chromatography with fluorescence and tandem mass spectrometric detection). The number of detected N-glycans obtained from ostrich egg white and yolk glycoproteomes was found to be 39 and 36, respectively. It was determined that Nglycans of ostrich egg white glycoproteome were highly galactosylated (96.64%). In addition, bisecting N-glycans were abundant in ostrich egg white glycoproteome (91.72%) compared to ostrich egg yolk glycoproteome (6.74%). The abundance of high-mannose N-glycans was dramatically higher in the ostrich egg yolk glycoproteome (55.84%) than the ostrich egg yolk glycoproteome (2.67%). The fucosylation ratio of N-glycans belonging to ostrich egg white and yolk glycoproteomes was detected to be 4.52% and 0.95%, respectively. The obtained data showed that N-glycan profiles of ostrich egg white and yolk glycoproteomes differed significantly.