N-propeptidaz izoenzimlerinden ADAMTS2 (a disintegrin and metalloproteinase with
thrombospondin motifs 2), prokollajenlerin amino uçlarının kesilip uzaklaştırılmasını sağlayarak
kollejen biyosentezinde görev alan bir enzimdir. ADAMTS2, prokollajenlerin işlenmesinin yanı
sıra anti-anjiyojenik aktiviteye de sahiptir. Bu aktivitesi ile kanser çalışmalarında bir hedef haline
gelmiştir. Hipoksik regülasyon hücresel düzeyde çok sayıda genin ifadesini etkileyen bir süreçtir.
Çalışmamız kapsamında ADAMTS2 geninin klonlanması ve ektopik olarak Saos-2 (insan kemik
karsinomu) hücre hattında ifadesi gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla ADAMTS2 kodlayıcı sekans
içeren ekspresyon vektörünün, Saos-2 hücrelerine kalsiyum-fosfat presipitasyonu ile geçici
transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir. Rekombinant ADAMTS2’nin Saos-2 hücrelerinde ektopik
olarak üretilip üretilmediği vektör transfekte edilmeyen hücrelerdeki ADAMTS2 mRNA ifadesi
ile kontrol edilmiştir. Transfekte edilen Saos-2 hücrelerinde ADAMTS2 mRNA ifadesi kontrol
grubuna kıyasla 50 kat artış olduğu gözlenmiştir. Daha sonra rekombinant ADAMTS2’nin Saos-
2 hücrelerinin koloni oluşturma potansiyeli üzerindeki etkisi hem normal hem de kimyasal olarak
indüklenmiş hipoksik koşullarda incelenmiştir. Kontrol grubu hücrelerine kıyasla normal
koşullarda ektopik ifadenin sağlandığı Saos-2 hücrelerinde koloni oluşumu azalmıştır. Ayrıca
Saos-2 hücrelerinde hipoksik koşullarda yapılan ektopik ifadenin hücrelerin koloni oluşturma
potansiyellerini üzerinde daha güçlü yönde azaltıcı etkisi tespit edilmiştir. Çalışmamızda, ilk kez
ADAMTS2'nin hipoksik koşullarda güçlü inhibe edici etkisi Saos-2 hücrelerinde belirlenmiştir.
ADAMTS2 (a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 2), an Npropeptidase
isoenzyme, is an enzyme involved in collagen biosynthesis by providing the amino
ends of procollagen to be cut away. ADAMTS2 has anti-angiogenic activity as well as provides
the processing of collagen. With this activity, it has become a target in cancer studies. Hypoxic
regulation is a process that affects the expression of a large number of genes at the cellular level.
Within the scope of our study, the cloning of the ADAMTS2 gene and its expression in Saos-2
(human bone carcinoma) cell line were performed ectopically. For this purpose, the transient
transfection of the expression vector containing ADAMTS2 coding sequence was transfected by
the calcium-phosphate precipitation method. Recombinant ADAMTS2 mRNA expression was
checked by Real-Time PCR in Saos-2 cells. It was observed that there was a 50-fold increase in
ADAMTS2 mRNA expression in the transfected Saos-2 cells compared to the control group.
Then, the effect of recombinant ADAMTS2 on the colony-forming potential of Saos-2 cells was
investigated in both normal and chemically induced hypoxic conditions. Colony formation was
reduced in Saos-2 cells, in which ADAMTS2 was expressed ectopically under normal conditions compared to control group cells. Also, a stronger reducing effect on the colony-formation
potential of ectopic expression in hypoxic conditions in Saos-2 cells was determined. In this study,
the strong inhibitory effect of ADAMTS2 in hypoxic conditions was determined in Saos-2 cells
for the first time.
